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大队列流式样本编码策略

在大队列流式样本研究中，为保证样本间实验操作的一致性，通常会先对每份样本进行barcoding编码，然后将所有样本混合成1管，进行统一的后期抗体染色等实验步骤。同批次对多个样本进行处理，可节约抗体等试剂，节省操作时间和重复性操作成本，减少因人工操作和机器状态带来的单个样本差异性，极大的提高实验结果的可靠性和准确性。

本次实验采用活细胞barcoding编码方案，用Cd（¹¹¹Cd、¹¹²Cd、¹¹⁶Cd）和Pt（¹⁹⁴Pt、¹⁹⁵Pt、¹⁹⁶Pt、¹⁹⁸Pt）标记的CD45作为编码抗体试剂，从7种同位素中任选3种，以金属组合编码的方式标记不同细胞样本，将样本编码上限拓展到了35人份。相比于市面上的20-plex Pd Barcoding编码需要先对细胞进行固定破膜，使用活细胞barcoding编码可以避免部分抗体在固定破膜后特异性不好、染色效果不佳的缺陷。

此外，该编码方式具备一定的可拓展性，以Cd（7种金属同位素）和Pt （4种金属同位素）标记的CD45为例，采用11选3方案，最多可进行165人份样本同批次处理与单管上样，为临床大样本队列和高通量药物筛选研究做准备。

应用方案

1、仪器配置

MSFLO 台式质谱流式细胞仪

2、实验设计

（1）Barcoding 设计

（2）主要试剂

3、结果分析

通过算法对混合样本进行解码，可有效鉴别35种编码方式对应的35个样本文件，热图和tSNE也能进一步证实35个样本之间区分明显，分离效果优秀。

（1）文件解码

（2）可视化分析

• 35个样本CD45 histogram

• 35个样本CD45 heatmap

（3）对解码后35个样本进行CD4/CD8 T cells、B cells、Monocytes和NK cells分群圈门，各细胞亚群分群效果较好，亚群比例统计结果如下：

解码后的35个样本以CD4/CD8 T细胞为例的分群效果：

金年会金字招牌信誉至上医学 MSFLO 质谱流式细胞仪致力于为生命科学领域提供强大的单细胞、多靶标检测技术手段，满足单细胞 40 色及以上检测指标需求，且通道间基本无串扰、无需调节补偿，背景信号低，工作模式丰富，为不同科学研究领域提供强有力的技术解决方案。