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人体免疫系统中存在大量的免疫细胞，它们能够精准识别并杀伤病毒、细菌等外来入侵者，并执行免疫监视功能，发现和清除体内出现的突变或衰老细胞，维持机体内环境的稳定，保障身体健康。一些疾病可以影响免疫细胞数目的增减，如患肺结核时，淋巴细胞有显著增加。因此，对外周血中免疫细胞进行分型、鉴定，是评估免疫功能和状态的重要方法。多色流式细胞术是一种通过流式细胞仪对单个细胞进行多参数、快速分析的生物医学检测技术，可以快速、准确地对细胞的成分、数量、状态、分化阶段等进行检测分析，是免疫精细分型的重要检测平台，帮助我们评估免疫状态和免疫功能。

本文使用SFLO3全光谱流式细胞仪分析新鲜健康人的 EDTA 抗凝全血样本的免疫细胞。通过20 色panel对CD4 T细胞和CD8 T细胞及相关亚群、调节性T细胞（Tregs、γδ T细胞、NKT细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞、嗜碱性粒细胞进行分析。具体方案如下表所示，整个panel全部为表面标记，无需固定破膜染色，方案简单易行，轻松实现20个荧光素的同时标记。

通过 SFLO 自带的CytoPysual分析软件进行手动圈门，具体策略如图1所示。

图1 人外周血淋巴细胞亚群分型

（20色）方案逻辑圈门

图2展示t-SNE分析淋巴细胞亚群的结果，计算机通过降维聚类，自动识别出13个细胞亚群，通过不同颜色进行标记区分，并在一张图中全部呈现，与手动圈门结果一致。

图2 t-SNE分析人外周血淋巴细胞亚群分型

图3全面展示了淋巴细胞亚群中各个marker的表达情况。通过颜色的深浅直观地表示各个marker的强弱表达情况，颜色越亮，marker表达越强。

图3 热图分析人外周血淋巴细胞亚群分型