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人体免疫系统中存在大量的免疫细胞，它们能够精准识别并杀伤病毒、细菌等外来入侵者，并执行免疫监视功能，发现和清除体内出现的突变或衰老细胞，维持机体内环境的稳定，保障身体健康。一些疾病可以影响免疫细胞数目的增减，如患肺结核时，淋巴细胞有显著增加。

因此，对外周血中免疫细胞进行分型、鉴定，是评估免疫功能和状态的重要方法。多色流式细胞术是一种通过流式细胞仪对单个细胞进行多参数、快速分析的生物医学检测技术，可以快速、准确地对细胞的成分、数量、状态、分化阶段等进行检测分析，是免疫精细分型的重要检测平台，帮助我们评估免疫状态和免疫功能。

金年会金字招牌信誉至上医学 SFLO系列 全光谱流式细胞仪

本文基于金年会金字招牌信誉至上医学 SFLO-3 全光谱流式细胞仪平台，设计了一个一管18色免疫分型方案，主要对人外周血的淋巴细胞亚群进行精细免疫分型，接下来就方案设计和分型结果进行介绍。

本文使用SFLO-3 全光谱流式细胞仪分析健康人体的新鲜EDTA抗凝全血样本的免疫细胞。通过18色panel对CD4和CD8 T细胞及相关亚群、调节性T细胞（Tregs）、γδ T细胞、NKT细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞进行分析。具体方案如下表所示，整个panel全部为表面标记，无需固定破膜染色，方案简单易行，轻松实现18种荧光染料的同时标记。

逻辑圈门：通过SFLO自带的CytoPysual分析软件进行手动圈门，具体策略如图1所示。

图1.人外周血淋巴细胞亚群分型（18色）方案圈门策略

高维数据分析：

图2展示t-SNE分析淋巴细胞亚群的结果，计算机通过降维聚类，自动识别出12个细胞亚群，通过不同颜色进行标记区分，并在一张图中全部呈现，与手动圈门结果一致。

图2. t-SNE分析人外周血淋巴细胞亚群分型

图3的热图全面展示了淋巴细胞亚群中各个marker的表达情况。通过颜色的深浅直观地表示各个marker的强弱表达情况，颜色越亮，marker表达越强。

图3.人外周血淋巴细胞亚群表面标志物表达情况