2023-12-26
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Th细胞亚群
淋巴细胞的水平是衡量机体免疫状态的重要指标,其中CD3+T淋巴细胞是研究的热点,CD3+ T细胞又可进一步分为CD3+CD4+辅助/诱导T淋巴细胞和CD3+CD8+抑制/杀伤T淋巴细胞。CD3+CD4+辅助/诱导T淋巴细胞即Th细胞,是一群高度异质性细胞,自1986年Mosmann等发现Th1、Th2亚群后,其他科学家又陆续发现了Th3、Treg、Tr1、Tfh、Th17、Th9和Th22等CD4+ 辅助性T(Th)细胞亚群,这些细胞亚群之间相互协调,共同发挥免疫调节作用,维持机体稳态。由于Th细胞亚群比例及功能异常往往指示着疾病的发生,例如机体感染、炎症反应、肿瘤、HIV、自身免疫性疾病以及过敏性疾病等,因此通过对Th细胞亚群分型进行分析,从而进一步对机体的免疫状态进行疾病分期和预测,有助于实现准确的疾病诊断和免疫功能的评估。
Th细胞亚群分化机制及细胞功能示意图
本文使用SFLO三激光全光谱流式细胞仪,分别通过趋化因子受体和细胞因子检测人外周血样本中的Th细胞亚群,并使用SFLO自带的CytoPysual软件进行手动圈门分析。
应用方案
Panel I 设计
人外周血Th细胞亚群分型(三激光13色)方案标志物如下表所示,方案中包括了白细胞、总T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、调节性T细胞、趋化因子受体的特征标志物。
逻辑圈门
如图1所示,此panel通过FSC-A/H去除粘连细胞,在SSC/CD45图中圈出SSCloCD45++的淋巴细胞门进行分析,淋巴细胞可以根据CD3表达区分出T细胞、非T(Non T),T细胞进一步通过CD4和CD8标志物的表征,可以有效区分出CD4+T细胞(Th细胞)、CD8+T细胞(CTL细胞)。在CD4+ T细胞亚群中,可以根据CD25和CD127的表达区分出Treg和Tconv细胞,也可以根据CXCR5和CD45R的表达区分出Tfh细胞。此外,通过CXCR3、CCR4的表达情况可以从CD4+ T细胞中区分出CCR4+CXCR3- Th细胞和CCR4-CXCR3+ Th细胞,其中,CCR4+CXCR3- Th细胞通过CCR10和CCR6的进一步表征,可以区分出Th2和Th17细胞,而CCR4-CXCR3+ Th细胞通过CCR10和CCR6的进一步表征,则可以区分出Th1和Th17.1细胞;通过CCR4和CCR6的表达可以从CD4+ T细胞中区分出Th9细胞和CCR4+CCR6+ Th细胞,其中,CCR4+CCR6+ Th细胞通过CXCR3和CCR10的进一步表征,可以区分出Th22细胞。
▲ 图1.人外周血Th 细胞亚群分型(三激光13色)方案圈门策略
Panel II 设计
人外周血Th细胞亚群分型(三激光12色)方案标志物如下表所示,方案中包括了白细胞、总T细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞、细胞因子的特征标志物。
逻辑圈门
使用新鲜采集的肝素抗凝血,经PMA/Ionomycin刺激活化、BFA/Monensin阻断,进行表染、固定破膜和胞内染色等步骤,上机检测。
如图2所示,此panel利用死活染料鉴定出活细胞,在SSC/CD45图中,圈出SSChiCD45+单核细胞群,进一步通过CD14可鉴定出CD14++经典单核细胞。在SSC/CD45图中,圈出SSCloCD45++淋巴细胞群,根据CD3表达鉴定出T细胞,T细胞进一步通过CD4和CD8标志物的表征,可以有效区分出CD4+T细胞(Th细胞)和CD8+ T细胞(CTL细胞)。在CD4+ T细胞亚群中,可进一步分析Th细胞亚群分泌细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和TNF-α)的情况。
▲ 图2.人外周血Th 细胞亚群分型(三激光12色)方案圈门策略
本文使用SFLO全光谱流式细胞仪,在三激光配置下检测人外周血Th细胞亚群,实现对细胞群体的精准免疫分型,分析细胞亚群之间的功能联系,为疾病诊断和免疫功能评估提供有力支持。
参考文献
唐洁,蒲姝陶.辅助性T细胞亚群分化机制及临床意义研究进展[J].巴楚医学,2020,3(04):103-107+116.
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